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液-固色譜法

放大字體  縮小字體 發布日期:2005-10-07

. 原理

    -固色譜法是利用各組分在固定相上吸附能力的不同而將它們分離的方法。

    當組分隨著流動相通過色譜柱中的吸附劑時,組分分子及流動相分子對吸附劑表面的活性中心發生吸附競爭。組分分子對活性中心的競爭能力的大小決定了它們保留值的大小。被活性中心吸附越強的組分分子越不容易被流動相洗脫,k

就大;反之k值就小。組分之間的k值相差越大,分離越容易。

    吸附劑吸附能力的強弱與吸附劑的比表面積、物理化學性質、組分分子的結構和組成以及流動相的性質等因素有關。

. 固定相

     -固吸附色譜所使用的固定相,多數是有吸附活性的吸附劑,常用的有表面多孔型和全多孔微粒型硅膠、氧化鋁、分子篩等。

 1. 表面多孔型:又稱薄殼型,是高效液相色譜使用的第一種填料。表面多孔填料的機械強度好,易填充均勻、緊密,滲透性好,表面孔隙淺,傳質快,柱效高,分離速度快。其主要缺點是由于比表面積小,柱容量低,允許進樣量小。

 2. 全多孔微粒型:目前廣泛使用的有球形和無定形兩種,顆粒直徑310um,它具有粒度小,比表面積大(100600m2g),孔穴淺,柱效高和柱容量大的優點。

. 流動相

實現最佳分離與流動相的選擇有關。溶劑的極性是重要的依據。溶劑的極性強弱可用溶劑強度參數 e0 來衡量。 e0 越大,表示洗脫劑的極性越強。

吸附色譜流動相的選擇原則是極性大的試樣需用極性強的洗脫劑,極性弱的試樣宜用極性較弱的洗脫劑。實際工作中常用兩種或兩種以上溶劑按不同比例混合作洗脫劑,以提供合適的溶劑強度和 k 值,提高分離的選擇性。在分離復雜試樣時,可進行梯度洗脫,能提高分離效率,改善峰形,加快分析速度。(高效液相色譜法中,流動相選擇雖然有一般的指導原則,但主要靠實踐經驗。)

 
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