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化學鍵合相色譜法

放大字體  縮小字體 發布日期:2005-10-07

. 原理

     “化學鍵合相色譜法”——采用化學鍵合相作固定相的液相色譜法。

     化學鍵合相是利用化學反應通過共價鍵將有機分子鍵合在載體(硅膠)表面,形成均一、牢固的單分子薄層而構成的固定相。其分離機理為吸附和分配兩種機理兼有。對多數鍵合相來說,以分配機理為主。

      通常,化學鍵合相的載體是硅膠,硅膠表面有硅醇基, Si–OH,它能與合適的有機化合物反應,獲得各種不同性能的化學鍵合相。

從鍵合反應的性質可分為:酯化鍵合(Si-O-C)、硅氮鍵合( Si-N)和硅烷化鍵合(Si-O-Si-C)等;硅烷化鍵合相應用最廣泛。這種鍵合相是用有機氯硅烷與硅醇基發生反應:

Si–OH + C18H37 SiCl3 Si-OSiC18H37 + HCl

                

    這種固定相在 pH = 28.5 范圍內對水穩定,有機分子與載體間的結合牢固,固定相不易流失穩定性好。

    十八烷基硅烷鍵合相(Octadecylsilane 簡稱ODSC18): 是最常用的非極性鍵合相。它們用于反相色譜法,在70℃以下和 pH 28范圍內可正常工作。

化學鍵合固定相具有如下優點:

  ①柱效高:傳質速度比一般液體固定相快;

  ②穩定性:耐溶劑沖洗,耐高溫,無固定液流失,從而提高了色譜柱的穩定性和使用壽命;

應用范圍廣:改變鍵合有機分子的結構和基團的類型,能靈活地改變分離的選擇性,適用于分離幾乎所有類型的化合物;且能用各種溶劑作流動相(梯度洗脫)。

. 流動相

   化學鍵合相色譜所用流動相的極性必須與固定相顯著不同,根據流動相和固定相的相對極性不同分為:

 1. 正相鍵合相色譜法:流動相極性小于固定相極性。

    常用非極性溶劑如烷烴類溶劑,樣品組分的保留值可用加入適當的有機溶劑(調節劑)的辦法調節洗脫強度。常用有機溶劑為極性溶劑如氯仿、二氯甲烷、已腈、醇類等。

    適用于分離中等極性化合物,如脂溶性維生素、甾族、芳香醇、芳香胺、脂、有機氯農藥等。

 2. 反相鍵合相色譜法:流動相極性大于固定相極性。

    流動相多以水或無機鹽緩沖液為主體,再加入一種能與水相混溶的有機溶劑(如甲醇、乙睛、四氫呋喃等)為調節,根據分離需要,改變洗脫劑的組成及含量,以調節極性和洗脫能力。在反相鍵合相色譜中,極性大的組分先流出,極性小的組分后流出。

    固定相一般為C18 C8

反相鍵合相色譜法應用最廣泛,因為它以水為底溶劑,在水中可以加入各種添加劑,改變流動相的離子強度、pH 值和極性等,以提高選擇性,而且水的紫外截至波長低,有利痕量組分的檢測,反向鍵合相穩定性好,不易被強極性組分污染,且水廉價易得,安全。

 
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