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免疫印跡技術和免疫斑點技術

放大字體  縮小字體 發布日期:2013-09-18  來源:實驗室資訊網
核心提示:免疫印跡技術又稱Western印跡法,它將凝膠電泳與固相免疫結合,首先通過蛋白質電泳技術將需要區分的蛋白質轉移至固相載體如NC膜等
 免疫印跡技術又稱Western印跡法,它將凝膠電泳與固相免疫結合,首先通過蛋白質電泳技術將需要區分的蛋白質轉移至固相載體如NC膜等上,再借助酶免疫、放射免疫等技術進行測定。該法能分離分子大小不同的蛋白質并確定其分子質量,常用于檢測多種病毒抗體或抗原。
 免疫印跡技術又稱Western印跡法,它將凝膠電泳與固相免疫結合,首先通過蛋白質電泳技術將需要區分的蛋白質轉移至固相載體如NC膜等上,再借助酶免疫、放射免疫等技術進行測定。該法能分離分子大小不同的蛋白質并確定其分子質量,常用于檢測多種病毒抗體或抗原。
 
 免疫斑點試驗(dotimmunobindingassay,DIBA)是利用硝酸纖維素膜(NC膜)或乙酸纖維素膜作為固相支持物,進行抗原—抗體反應的免疫學檢測方法。該法具有微量、快速、經濟、方便等特點,可用于檢測抗體或抗原。
 
 免疫斑點技術的原理是硝酸纖維素膜和醋酸纖維素膜具有很強的靜電吸附力,在中性條件下即可有效地吸附蛋白質等生物大分子,因而將抗原吸附于纖維素膜后,就可利用纖維素膜作為固相載體進行抗原—抗體反應。當加入抗體后(即可與膜上的抗原結合,然后再加入帶有標記物的抗體,使標記通過抗抗體和相應抗體的結合間接地交聯于纖維素膜上。加入標記物相應的底物后,標記物即可與底物作用形成不溶性產物,呈現斑點狀著色,從而判定結果。
 
根據所用的標記物不同,可分為辣根過氧化物酶免疫斑點試驗(使用辣根過氧化物酶作為抗抗體的標記物)、堿性磷酸酶免疫斑點試驗(使用堿性磷酸酶抗堿性磷酸酶復合物作為酶標記物)和金銀染色免疫斑點試驗(使用膠體金作為抗抗體的標記物)等。其中,最常用的是以辣根過氧化物酶標記系統為基礎的免疫斑點試驗。
編輯:songjiajie2010

 
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