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菌落計數(shù)的基本步驟

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2024-03-29  來源:網(wǎng)絡
核心提示: 一、菌落計數(shù)的一般步驟1、樣品的稀釋2、培養(yǎng)和計數(shù)3、結(jié)果與報告二、具體過程1、樣品的稀釋(1)固體和半固體樣品稱取25g
 一、菌落計數(shù)的一般步驟

1、樣品的稀釋

2、培養(yǎng)和計數(shù)

3、結(jié)果與報告

二、具體過程

1、樣品的稀釋

(1)固體和半固體樣品

稱取25g置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi),8000r/min~10000r/min均質(zhì)1min~2min,或放入盛有225mL稀釋液的無菌均質(zhì)袋中,用拍擊式均質(zhì)器拍打1min~2min,制成1:10的樣品勻液。

(2)液體樣品

以無菌吸管吸取25mL樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶(瓶內(nèi)預置適當數(shù)量的無菌玻璃珠)中,充分混勻,制成1:10的樣品勻液。

上步完成后,用1mL無菌吸管或微量移液器吸取1:10樣品勻液1mL,沿管壁緩慢注于盛有9mL稀釋液的無菌試管中(注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面),振搖試管或換用1支無菌吸管反復吹打使其混合均勻,制成1:100的樣品勻液。

根據(jù)對樣品污染狀況的估計,選擇1個~3個適宜稀釋度的樣品勻液(液體樣品可包括原液),在進行10倍遞增稀釋時,吸取1mL樣品勻液于無菌平皿內(nèi),每個稀釋度做兩個平皿。同時,分別吸取1mL空白稀釋液加入兩個無菌平皿內(nèi)作空白對照。

之后,及時將15mL~20mL冷卻至48℃的平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基(可放置于48℃±2℃恒溫水浴箱中保溫)傾注平皿,并轉(zhuǎn)動平皿使其混合均勻。

2、注意事項

移液過程使用的器具,都應避免微生物污染。使用耐高壓移液槍,核查洗耳球無菌程度,避免移液槍觸及均質(zhì)袋或試管內(nèi)壁……

樣品勻液完成后,可按相同操作,制備10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次,換用1次1mL無菌吸管或吸頭。

3、培養(yǎng)和計數(shù)

樣品稀釋完成后,就要進行培養(yǎng)和菌落計數(shù)了。

待瓊脂凝固后,將平板翻轉(zhuǎn),36℃±1℃培養(yǎng)48h±2h。水產(chǎn)品30℃±1℃培養(yǎng)72h±3h。

如果樣品中可能含有在瓊脂培養(yǎng)基表面彌漫生長的菌落時,可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養(yǎng)基(約4mL),凝固后翻轉(zhuǎn)平板,按相同條件進行培養(yǎng)。

培養(yǎng)完成后,就要進行菌落計數(shù)了,計數(shù)可用肉眼觀察,必要時用放大鏡或菌落計數(shù)器,記錄稀釋倍數(shù)和相應的菌落數(shù)量。菌落計數(shù)以菌落形成單位(colony-forming units,CFU)表示。

選取菌落數(shù)在30CFU~300CFU之間、無蔓延菌落生長的平板計數(shù)菌落總數(shù)。低于30CFU的平板記錄具體菌落數(shù),大于300CFU的可記錄為多不可計。每個稀釋度的菌落數(shù)應采用兩個平板的平均數(shù)。

(1)大片菌落

其中一個平板有較大片狀菌落生長時,則不宜采用,而應以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù);若片狀菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均勻,即可計算半個平板后乘以2,代表一個平板菌落數(shù)。

(2)鏈狀生長

當平板上出現(xiàn)菌落間無明顯界線的鏈狀生長時,則將每條單鏈作為一個菌落計數(shù)。

(3)結(jié)果與報告

為了生成結(jié)果和報告,需要根據(jù)計數(shù)結(jié)果和公式計算出菌落總數(shù)。需要注意的是,對于菌落數(shù)量不同的培養(yǎng)皿,計數(shù)原則有所不同。

若所有平板上為蔓延菌落而無法計數(shù),則報告菌落蔓延。若空白對照上有菌落生長,則此次檢測結(jié)果無效。

稱重取樣以CFU/g為單位報告,體積取樣以CFU/mL為單位報告。

編輯:songjiajie2010

 
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