在线观看亚洲精品专区-在线观看亚洲免费-在线观看亚洲免费视频-在线观看亚洲欧美-欧美freexxx-欧美free嫩交video

食品伙伴網服務號
當前位置: 首頁 » 檢驗技術 » 食品采樣技術 » 正文

PCR實驗常見問題、原因分析及其解決方案!

放大字體  縮小字體 發布日期:2019-03-26  來源:實驗之家
核心提示:PCR實驗常見問題、原因分析及其解決方案。
PCR產物的電泳檢測時間,一般為48h以內,有些最好于當日進行檢查,大于48h后帶型不規則甚至消失。
但有時仍會與到這樣那樣的問題,影響檢測結果的判斷,具體歸類為以下常見的4點,描述如下:

問題一:無擴增產物
現象:正對照有條帶,而樣品則無。

原因:
1、模板:含有抑制物,含量低。
2、Buffer對樣品不合適。
3、引物設計不當或者發生降解。
4、反應條件:退火溫度太高,延伸時間太短。

對策:
1、純化模板或者使用試劑盒提取模板DNA或加大模板的用量。
2、更換Buffer或調整濃度。
3、重新設計引物(避免鏈間二聚體和鏈內二級結構)或者換一管新引物。
4、降低退火溫度、延長延伸時間。

問題二:非特異性擴增
現象:條帶與預計的大小不一致或者非特異性擴增帶。

原因:
1、引物特異性差。
2、模板或引物濃度過高。
3、酶量過多。
4、Mg2+濃度偏高。
5、退火溫度偏低。
6、循環次數過多。

對策:
1、重新設計引物或者使用巢式PCR。
2、適當降低模板或引物濃度。
3、適當減少酶量。
4、降低鎂離子濃度。
5、適當提高退火溫度或使用二階段溫度法。
6、減少循環次數。

問題三:拖尾
現象:產物在凝膠上呈Smear狀態。

原因:
1、模板不純。
2、Buffer不合適。
3、退火溫度偏低。
4、酶量過多。
5、dNTP、Mg 2+濃度偏高。
6、循環次數過多。

對策:
1、純化模板。
2、更換Buffer。
3、適當提高退火溫度。
4、適量用酶。
5、適當降低dNTP和鎂離子的濃度。
6、減少循環次數。

問題四:假陽性
現象:空白對照出現目的擴增產物。

原因:
靶序列或擴增產物的交叉污染。

對策:   
1、操作時應小心輕柔,防止將靶序列吸入加樣槍內或濺出離心管外。
2、除酶及不能耐高溫的物質外,所有試劑或器材均應高壓消毒。所用離心管及加樣槍頭等均應一次性使用。
3、各種試劑最好先進行分裝,然后低溫貯存。
編輯:songjiajie2010

 
分享:
[ 網刊訂閱 ]  [ 檢驗技術搜索 ]  [ ]  [ 告訴好友 ]  [ 打印本文 ]  [ 關閉窗口 ] [ 返回頂部 ]
 

 
 
推薦圖文
推薦檢驗技術
點擊排行
檢驗技術
 
 
Processed in 0.024 second(s), 13 queries, Memory 0.95 M
主站蜘蛛池模板: 国产在线色视频 | 日本免费黄色片 | 嫩草影院网站入口 | 日韩基地1024首页 | 康熙古代高h细节肉爽文全文 | 免费又爽又黄的禁片1000部 | 午夜视频在线观看免费视频 | 日韩午夜r电影在线观看 | 色狠狠xx| 天天操天天射天天爽 | 精品国产一区二区三区成人 | 久久国产午夜精品理论片34页 | 免费爱爱视频 | 99pao在线视频精品免费 | 天天操精品 | 亚洲一区有码 | 午夜一级| 国产一区二区中文字幕 | 国产美女一级高清免费观看 | 色婷婷综合激情视频免费看 | 亚洲人成影院在线高清 | 伊人欧美在线 | 天堂在线观看视频 | 九九精品免费观看在线 | 国产人成午夜免视频网站 | 韩国三级中文字幕hd | sihu免费观看在线高清 | 中文字幕卡二和卡三的视频 | 91视频看看 | 超大乳抖乳露双乳视频 | 国产精品资源网站在线观看 | 素股中文字幕 | 欧美成人性动漫在线观看 | 2021最新久久久视精品爱 | 午夜国产高清精品一区免费 | 午夜免费观看福利片一区二区三区 | 亚洲人成电影在线小说网色 | 免费网站成人亚洲 | 国产精品成人va在线观看入口 | 啪啪在线视频 | 男女视频在线 |