請參考標準GB/T 4789.3-2003和SN 0169-1992標準上寫得很清楚
可以使用發酵管推算MPN值,也可以使用固體瓊脂平板計數
相關標準可以去標準庫里下載
http://www.blzgs.cn/standard/
另外也可以考慮使用3M的計數片
如果是結果判定中有疑問,請具體說明。
總大腸菌群的測定
一、 測定方法
濾膜法
二、 方法依據
《生活飲用水衛生規范》(2001)
三、 測定范圍
生活飲用水及其水源水中總大腸菌群的測定
四、 測定原理
用孔徑為0.45µm的微孔濾膜過濾水樣,細菌被截留在濾膜上,將濾膜貼在選擇性培養基上,經培養后,計數生長在濾膜上的典型大腸菌群落數。
五、 試劑
1、品紅亞硫酸鈉培養基
1.1成份
A蛋白胨 10g
B酵母浸膏 5g
C牛肉膏 5g
D乳糖 10g
E瓊脂 15~20g
F磷酸氫二鉀 3.5g
G無水亞硫酸鈉 5g左右
H堿性品紅乙醇溶液(50g/L) 20mL
I蒸餾水 1000mL
1.2儲備培養基的準備
先將瓊脂加到500mL蒸餾水中,煮沸溶解,于另500mL蒸餾水中加入磷酸氫二鉀、蛋白胨、酵母浸膏和牛肉膏,加熱溶解,倒入已溶解的瓊脂,補足蒸餾水至1000mL,混勻后調pH為7.2~7.4,再加入乳糖,分裝,115℃高壓滅菌20min,儲存于冷暗處備用。
1.3平皿培養基的配制
將上法制備的儲備培養基加熱融化,用滅菌吸管按比例吸取一定量的堿性品紅乙醇溶液,置于滅菌空試管中,再按比例稱取所需的無水亞硫酸鈉置于另一滅菌試管中,加滅菌水少許,使其溶解后,置沸水浴中煮沸10min以滅菌。
用滅菌吸管吸取已滅菌的亞硫酸鈉溶液,滴加于堿性品紅乙醇溶液至深紅色退成淡粉色為止,將此亞硫酸鈉與堿性品紅的混合液全部加到已融化的儲備培養基內,并充分混勻(防止產生氣泡),立即將此種培養基15mL傾入已滅菌的空平皿內。待冷卻凝固后置冰箱內備用。此種已制成的培養基于冰箱內保存不宜超過二周。如培養基已由淡粉色變成深紅色,則不能再用。
2. 乳糖蛋白胨培養液,同作業指導書(一)
六、 儀器設備
1. 濾器
2. 濾膜,孔徑0.45~0.65µm.直徑根據濾器規格,目前常用的有3.5cm和4.7cm兩種。
3. 抽濾設備
4. 無齒鑷子
5. 其他儀器同作業指導書(一)
七、 分析步驟
1、準備工作
1.1濾膜滅菌:將濾膜放入燒杯中,加入蒸餾水,置于沸水浴中煮沸滅菌三次,每次15min。前兩次煮沸后需換水洗滌2~3次,以除去殘留溶劑。
1.2濾器滅菌:用點燃的酒精棉球,火焰滅菌。也可用121℃高壓滅菌20min。
2、過濾水樣
用無菌鑷子夾取滅菌濾膜邊緣部分,將粗糙面向上,貼放在已滅菌的濾床上,固定好濾器,將100mL水樣(如水樣含菌數較多,可減少過濾水樣量,或將水樣稀釋)注入濾器中,打開濾器閥門,在負0.5大氣壓下抽濾。
3、培養
水樣濾完后,再抽氣約5s,并上濾器閥門,取下濾器,用滅菌鑷子夾取濾膜邊緣部分,移放在品紅亞硫酸鈉培養基上,濾膜截留細菌面向上,濾膜應與培養基完全貼緊,兩者不得留有氣泡,然后將平皿倒置,放入37℃恒溫箱內培養22~24h。
八、 計算
挑出符合下列特征菌落進行革蘭氏染色、鏡檢。
紫紅色,具有金屬光澤的菌落。
深紅色,不帶或略帶金屬光澤的菌落。
淡紅色,中心色較深的菌落。
1、凡革蘭氏染色為陰性的無芽胞桿菌,再接種乳糖蛋白胨培養液,于37℃培養24h,有產酸產氣者,則判定為總大腸菌群陽性。 2、計算濾膜上生長的總大腸菌群數,以每100mL水樣中的總大腸菌群數報告之(CFU/100mL)。
總大腸菌群菌落數(CFU/100mL)=數出的總大腸菌群菌落數×100 /過濾的水樣體積(mL)