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載體

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-07-08
載體(Vector)是把外源DNA(目的基因)導入宿主細胞,使之傳代、擴增、表達的工具。載體有質粒(plasmid)、噬菌體、單鏈絲狀噬菌體和粘性末端質粒(粘粒)、病毒等。載體具有能自我復制;有可選擇的,便于篩選、鑒定的遺傳標記;有供外源DNA插入的位點;本身體積小等特征。
  質粒存在于多種細菌,是染色體(核)以外的獨立遺傳因子,由雙鏈環狀DNA組成,幾乎完全裸露,很少有蛋白質結合。質粒有嚴緊型和松弛型之分。嚴緊型由DNA多聚酶Ⅲ復制,一個細胞可復制1-5個質粒。而松弛型由DNA多聚酶Ⅰ復制,一個細胞可復制30-50個質粒,如果用氯霉素可阻止蛋白質合成,使質粒有效利用原料,復制更多的質粒。質粒經過改造品種繁多,常用的有pBR322、pUC系列等。這些質粒都含有多個基本基因,如復制起動區(復制原點Ori),便于復制擴增;抗抗生素標記(抗氨芐青霉素Apr、抗四環素Tcr等)或大腸埃希菌部分乳糖操縱子(E.coli LacZ)等,便于基因重組體的篩選;基因發動子(乳糖操縱子Lac、色氨酸操縱子Trp等)和轉錄終止序列,便于插入的外源基因轉錄、翻譯表達。質粒上還有許多限制性內切酶的切點,即基因插入位點,又叫基因重組位點,基因克隆位點。
  常用噬菌體載體有單鏈噬菌體M13系統;雙鏈噬菌體系統。噬菌體應和相應的宿主細胞配合使用。以上載體各有特點,便于選擇,靈活應用。
 
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