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膠體金標(biāo)記技術(shù)在免疫學(xué)中的應(yīng)用

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-06-27

膠體金標(biāo)記技術(shù)由于標(biāo)記物的制備簡便,方法敏感、特異,不需要使用放射性同位素,或有潛在致癌物質(zhì)的酶顯色底物,也不要熒光顯微鏡,它的應(yīng)用范圍廣,除應(yīng)用于光鏡或電鏡的免疫組化法外,更廣泛地應(yīng)用于各種液相免疫測定和固相免疫分析以及流式細(xì)胞術(shù)等。
1.液相免疫測定:將膠體金與抗體結(jié)合,建立微量凝集試驗(yàn)檢測相應(yīng)的抗原,如間接血凝一樣,用肉眼可直接觀察到凝集顆粒。利用免疫學(xué)反應(yīng)時(shí)金顆粒凝聚導(dǎo)致顏色減退的原理,建立均相溶膠顆粒免疫測定法(Sol particle immunoassay ,SPIA)已成功地應(yīng)用于PCG的檢測,直接應(yīng)用分光光度計(jì)進(jìn)行定量分析。
2.金標(biāo)記流式細(xì)胞術(shù):膠體金可以明顯改變紅色激光的散射角,利用膠體金標(biāo)記的羊抗鼠Ig抗體應(yīng)用于流式細(xì)胞術(shù),分析不同類型細(xì)胞的表面抗原,結(jié)果膠體金標(biāo)記的細(xì)胞在波長632nm時(shí),90度散射角可放大10倍以上,同時(shí)不影響細(xì)胞活性。而且與熒光素共同標(biāo)記,彼此互不干擾。
3.膠體金固相免疫測定法
(1)斑點(diǎn)免疫金銀染色法(Dot-IGS/IGSS)是將斑點(diǎn)ELISA與免疫膠體金結(jié)合起來的一種方法。將蛋白質(zhì)抗原直接點(diǎn)樣在硝酸纖維膜上,與特異性抗體反應(yīng)后,再滴加膠體金標(biāo)記的第二抗體,結(jié)果在抗原抗體反應(yīng)處發(fā)生金顆粒聚集,形成肉眼可見的紅色斑點(diǎn),此稱為斑點(diǎn)免疫金染色法(Dot-IGS)。此反應(yīng)可通過銀顯影液增強(qiáng),即斑點(diǎn)金銀染色法(Dot-IGS/IGSS)。
(2)斑點(diǎn)金免疫滲濾測定法(dot immuno-gold filtration assay,DIGFA)此法原理完全同斑點(diǎn)免疫金染色法,只是在硝酸纖維膜下墊有吸水性強(qiáng)的墊料,即為滲濾裝置。在加抗原(抗體)后,迅速加抗體(抗原),再加金標(biāo)記第二抗體,由于有滲濾裝置,反應(yīng)很快,在數(shù)分鐘內(nèi)即可顯出顏色反應(yīng)。此方法已成功地應(yīng)用于人的免疫缺陷病病毒(HIV)的檢查和人血清中甲胎蛋白的檢測。

 

 
鏇村

 

 
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