材料與試劑

以布氏桿菌病平板凝集反應(yīng)為例。

1．玻璃板、刻度吸管等。

2．布氏桿菌平板凝集抗原、布氏桿菌標(biāo)準(zhǔn)陽性血清。

操作方法

1．取潔凈玻板一塊，用玻璃鉛筆劃成方格，并注明待檢血清號(hào)碼。

2．取０.２ml吸管分別吸取0.08ml、0.04ml、0.02ml和0.01ml各放入一方格內(nèi)。大規(guī)模檢驗(yàn)時(shí)，可只做２個(gè)血清量，大動(dòng)物用0.04ml和0.02ml，中小動(dòng)物用0.08ml和0.04ml。每檢一個(gè)樣品需換一只吸管。

3．每格內(nèi)加布氏桿菌平板凝集抗原0.03ml，滴在血清附近，而不要與血清接觸。用牙簽（或火柴桿）自血清量最小的一格起，將血清與抗原混勻，每份血清用一根牙簽。

4．混合完畢，將玻板置凝集反應(yīng)箱上均勻加溫或采用別的辦法適當(dāng)加溫，使溫度達(dá)到３０℃左右。3min～5min內(nèi)記錄結(jié)果。

結(jié)果判定

＋＋＋＋：出現(xiàn)大的凝集塊，液體完全清亮透明，即100％凝集。

＋＋＋　：有明顯的凝集片，液體幾乎完全透明，即75％凝集。

＋＋　　：有可見的凝集片，液體不甚透明，即50％凝集。

＋　　　：液體混濁，有小的顆粒狀物，即25％的凝集。

－　　　：液體均勻混濁，即不凝集。

以出現(xiàn)＋＋凝集的血清最高稀釋倍數(shù)作為該份血清的凝集價(jià)。大動(dòng)物（牛、馬、駱駝等）以0.02ml出現(xiàn)凝集價(jià)判為布氏桿菌病血清陽性，0.04ml出現(xiàn)凝集價(jià)判為可疑。中小動(dòng)物（豬、山羊、綿羊等）以0.04ml出現(xiàn)凝集價(jià)判為該份血清為布氏桿菌病陽性血清，0.08ml出現(xiàn)凝集價(jià)判為可疑。

注意事項(xiàng)

1．每次試驗(yàn)必須以標(biāo)準(zhǔn)陽性血清和標(biāo)準(zhǔn)陰性血清進(jìn)行對(duì)照。

2．加抗原前必須搖勻。

3．反應(yīng)溫度最好保證在30℃左右，3min～5min內(nèi)判定。如反應(yīng)溫度偏低，可適當(dāng)延

長判讀時(shí)間。

4．如用兩個(gè)血清量作試驗(yàn)，任何一個(gè)血清量出現(xiàn)凝集反應(yīng)時(shí)，則需要用四個(gè)血清量重檢。

5．平板凝集反應(yīng)最好是用于初篩，如出現(xiàn)陽性或可疑反應(yīng)，再用試管凝集反應(yīng)進(jìn)行復(fù)檢，以定性。

6．平板凝集反應(yīng)與試管凝集反應(yīng)的關(guān)系。

表 平板凝集反應(yīng)與試管凝集反應(yīng)的關(guān)系