原理

將放射性元素標(biāo)記的抗體（或抗原）與相應(yīng)的抗原（或抗體）沉淀時(shí)，沉淀線通過自顯影而證實(shí)。所謂自顯影，就是通過復(fù)合物中的標(biāo)記同位素在蛻變過程中放出的射線，作用于感光材料的鹵化銀晶體而產(chǎn)生潛影，再經(jīng)過顯影把“像”顯示出來。這樣，能檢出肉眼看不見的沉淀線，從而提高反應(yīng)的敏感性，這種方法可應(yīng)用于凝膠中的所有反應(yīng)。

材料

1．放射性同位素標(biāo)記的抗原或抗體

2．X—射線膠片或全色膠片

3．顯影液與定影液

4．其它同對(duì)流免疫電泳

操作方法

1．按對(duì)流免疫電泳制備凝膠板并打孔。

2．加樣 陰極端孔內(nèi)加抗原，陽極端孔內(nèi)加抗體。在加被檢抗體樣品時(shí)，迅速加入標(biāo)記抗原（2 000~3 000cpm），并使之混合，勿使抗原吸收后再加標(biāo)記抗原，以免由于標(biāo)記原的滯面而形成假陽性。

3．電泳 電流2.6cm×7.5cm的小板用4mA。

4．電泳后，平板浸在3％HCl中漂洗8h，換液2次。

5．用流水漂洗過夜。

6．干燥 室溫或鼓風(fēng)機(jī)吹干。

7．曝光 在暗室將膠片切成與平板一樣大小，然后將藥面密接凝膠面，再在膠片上壓一張玻板，用黑布包嚴(yán)，皮筋扎緊，曝光時(shí)間與所用同位素及保存期有關(guān)。181I，一周內(nèi)5h~10h；1~2周內(nèi)24h；2~3周內(nèi)48h。125I，在2個(gè)月內(nèi)10h。

8．沖洗 全色膠片沖片方法，水洗、20℃顯影10min、水洗、定影、水洗、涼干，觀察結(jié)果。

結(jié)果判定

在抗原抗體孔之間形成一條清晰的黑色影像者，判為陽性。