1.1

三區(qū)平板劃線

三區(qū)劃線中第一區(qū)所占的區(qū)域大約是平板面積的五分之一到四分之一。第二區(qū)搭過第一區(qū)的面積使微生物數(shù)量得到“稀釋”，第三區(qū)搭過第二區(qū)的面積使微生物數(shù)量進(jìn)一步“稀釋”，第三區(qū)不可與第一區(qū)有重疊的劃線。一般適用于可疑菌落的分離，或可疑菌落的二次平板分離。通常劃完三區(qū)后就可以出現(xiàn)單菌落。三區(qū)劃線如下圖。

1.2

四區(qū)平板劃線

四區(qū)平板劃線與上面的三區(qū)劃線類似，只是每一區(qū)的劃線面積相應(yīng)減小，同樣第三區(qū)不可與第一區(qū)相重疊，第四區(qū)不可與第二區(qū)和第一區(qū)相重疊，四區(qū)劃線比三區(qū)劃線多稀釋一次，這樣通過增加劃線區(qū)域，有可能會分離到更多更純的單菌落。

1.3

單次連續(xù)“之”字平板劃線

其實在微生物劃線接種中，無論是試管斜面劃線接種還是平板劃線接種，都會用到“之”字劃線。“之”字劃線的要領(lǐng)是：往復(fù)不間斷劃線，但是又不與劃過的路線重復(fù)或重疊。如果菌量比較大，就可以劃得更為密集或者增加一塊平板繼續(xù)“之”字劃線（即連續(xù)劃兩塊板）。“之”字劃線一般適用于分離本身在此培養(yǎng)基上單一且黏性較大的菌類或可疑菌落的純培養(yǎng)。操作如下圖所示。

1.4

網(wǎng)狀平板劃線

網(wǎng)狀平板花線，其實就是兩次方向垂直的“之”字劃線重疊在一起，一般用于純培養(yǎng)，目的是通過增加更多的劃線路徑來獲得更多的純培養(yǎng)物，特別是針對一些生長較慢或菌落非常細(xì)小的菌類。

三區(qū)劃線法的具體步驟

在以上的這些平板劃線的方式中，三區(qū)平板劃線最常用的是分區(qū)劃線法，詳細(xì)步驟如下：

① 將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種還環(huán)燒紅。

② 在火焰旁冷卻接種換環(huán)，打開試管塞。

③ 將試管口通過火焰，旋轉(zhuǎn)試管口并小幅度來回移動試管，切不可長時間讓試管口停滯于火焰上加熱。

④ 將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中，挑取一環(huán)菌液。

⑤ 將試管口通過火焰幾次后，塞上試管塞。將試管放回試管架。

⑥ 左手拿起培養(yǎng)皿，將培養(yǎng)皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌液的接種環(huán)迅速深入平皿內(nèi)。從平皿邊緣開始“之”字劃線（基準(zhǔn)線也稱第一區(qū)域），大約劃過平皿的五分之一到四分之一左右的面積。關(guān)閉培養(yǎng)皿蓋，將培養(yǎng)皿調(diào)轉(zhuǎn)大約120°。再次灼燒接種環(huán)，將接種環(huán)在空氣中或靠在培養(yǎng)皿蓋內(nèi)側(cè)冷卻后從第一區(qū)域末端開始往第二區(qū)內(nèi)劃線。兩個區(qū)域劃線的交角大約是120°。重復(fù)以上動作，完成第三區(qū)（甚至第四區(qū)）劃線操作。注意：當(dāng)前操作的劃線只能與相鄰前一區(qū)域相交，絕不能與其他區(qū)域的劃線有重疊。

一般三區(qū)劃線就能分離出單菌落，第一區(qū)和第二區(qū)前部的細(xì)菌生長成“直線”，第二區(qū)后部的細(xì)菌生長呈“虛線”。第三區(qū)呈“虛線”和離散的“小點”（即單菌落）。