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淺談實時熒光PCR儀

放大字體  縮小字體 發布日期:2024-02-01  來源:體外診斷價值圈公眾號
核心提示:PCR中文翻譯為聚合酶鏈式反應。自1985年PCR技術發明以來,技術發展已非常成熟了,PCR儀主要可以劃分為三類,即:常規PCR儀、實時


PCR中文翻譯為聚合酶鏈式反應。自1985年PCR技術發明以來,技術發展已非常成熟了,PCR儀主要可以劃分為三類,即:常規PCR儀、實時熒光定量PCR儀、數字PCR儀
  我們今天主要講實時熒光PCR儀。

PCR技術在近30年的不斷發展創新中,最受矚目的當屬熒光實時定量PCR技術(real-time quantitative PCR,或qPCR)

定量PCR技術真正實現了PCR從定性到定量的飛躍,通過對PCR過程的實時監控,專一、靈敏快速、可重復地精確定量起始模板濃度,已經在科研和臨床診斷領域得到了越來越廣泛的應用。

PCR的工作原理是變性、退火、延伸三個步驟。

而對于實時熒光PCR儀的工作原理展開來講就是:將標記有熒光素的Taqman探針與模板DNA混合后,完成高溫變性、低溫復性、適溫延伸的熱循環,并遵守聚合酶鏈反應規律,與模板DNA互補配對的Taqman探針被切斷,熒光素游離于反應體系中,在特定光激發下發出熒光;隨著循環次數的增加,被擴增的目的基因片段呈指數規律增長,通過實時檢測與之對應的隨擴增而變化熒光信號強度,求得Ct值(也就是,循環閾值,即:每個反應管內的熒光信號到達設定閾值時所經歷的循環數),同時利用數個已知模板濃度的標準品作對照,即可得出待測標本目的基因的拷貝數。

這么講可能你還不能完全理解,那你可以這么去理解,一個實時熒光定量PCR儀,最關鍵的是兩大系統,一個光電系統,一個溫控系統。光電系統是用來進行光電信號收集和轉換的,溫控系統是用來維持核酸擴增所需對應溫度條件的。最后電腦自帶軟件系統會通過相關關系方程式換算出臨床定量結果。

關于實時熒光PCR儀的廠家主要如下:

進口廠家有羅氏診斷、美國伯樂、美國ABI(ABI已經被賽默飛收購)。

國產老牌廠家主要是:上海宏石、杭州博日、西安天隆。

編輯:songjiajie2010

 
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