培養基傾注的適宜溫度大約為45℃-50℃。可以用手心和手背的感覺來大致判斷溫度，手心感覺不燙，而手背感覺燙手時，溫度大概就是50℃左右。溫度過高會導致凝固時間延長，且皿蓋上會有大量冷凝水，不利于后續實驗；溫度過低則可能導致倒板過程中瓶中培養基部分凝固。

二、靜置時間

培養基滅菌后應放置在水浴或烘箱中保溫，使用前拿出直接倒板。培養基的靜置時間不宜過長，一般不超過4小時，以避免瓊脂少量凝固。

三、平板準備

倒皿前，平皿應預熱保持在35℃-40℃的溫度。如果需要表面接種，有冷凝水的平板表面容易產生蔓延菌落。這時可放在有對流的無菌凈化臺中吹干培養基表面，但不能過度干燥，否則培養過程中平板容易開裂。

四、傾注量與混合

平板傾注量一般在18-20mL左右。如果培養時間超過48小時或培養溫度高于40℃，為防止水分過量蒸發導致平板開裂，傾注量一般為25mL左右。傾注時盡量貼著平皿壁緩慢倒入，將氣泡留在瓶子底部。如果平板中有少量氣泡，可以把氣泡輕搖到平板壁上，這樣不會影響結果觀察。另外，每個平板中加入融化后的瓊脂培養基時，要迅速往復搖動和轉圈晃動5-15次，使培養基與接種物充分混合。

五、避免污染

在整個操作過程中，需要注意避免污染。使用前需將裝有培養基的瓶子或試管弄松，然后放在滾水或蒸汽浴里進行溶解，要小心避免培養基過熱變質。已消毒培養皿的數量要比所測樣品的數量多一個，用作空白對照

六、培養

待平板冷卻后翻轉并置于適當的溫度下培養。倒平板后，可以打開皿蓋，讓其在超凈臺中凝固5分鐘后再關閉皿蓋，倒置放置備用；也可以采用一個接一個地倒置培養皿的方式，直到全部凝固后再倒置備用，這樣可以有效地減少皿蓋上的水蒸氣產生。