在线观看亚洲精品专区-在线观看亚洲免费-在线观看亚洲免费视频-在线观看亚洲欧美-欧美freexxx-欧美free嫩交video

VIP標識 上網做生意,首選VIP會員| 設為首頁| 加入桌面| | 手機版| RSS訂閱
食品伙伴網服務號
 

DNA片段回收與純化

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-06-28
質粒、噬菌體等經酶切,電泳;PCR產物經電泳后,常常需要對一些DNA電泳片段進行回收和純化,用于亞克隆、探針標記等。DNA回收和純化常用方法有壓碎法、低融點瓊脂糖法、凍融法等,也有現成的試劑盒供應。
一、凍融法
1. 紫外燈下仔細切下含待回收DNA的膠條,將切下的膠條(小于0.6g)搗碎,置于1.5ml離心管中;
2. 加入等體積的Tris-HCl飽和酚(pH 7.6),振蕩混勻;
3. -20℃放置5-10min;
4. 4℃離心10000g×5min,上層液轉移置另一離心管中;
5. 加入1/4體積H2O于含膠的離心管中,振蕩混勻;
6. -20℃,放置5-10min;
7. 4℃離心10000g×5min,合并上清液;
8. 用等體積酚/氯仿、氯仿分別抽提一次,取上清;
9. 加入1/10體積3M NaAc(pH 5.2)、2.5倍體積預冷的無水乙醇,混勻;
10. -20℃,靜置30min;
11. 4℃離心13000g×10min,棄上清,75%乙醇洗沉淀1-2次,晾干;
12. 加適量H2O或TE溶解沉淀。
二、DNA回收試劑盒(QIAquick Gel Extraction Kit Protocol)
1. 紫外燈下仔細切下含待回收DNA的凝膠,置1.5ml離心管中,稱重。
2. 加入Buffer QG(每100mg凝膠加Buffer QG 300μl),置50℃水浴10min。
3. 若回收片段小于500bp或大于4kb,則需加入異丙醇(每100mg凝膠加異丙醇100μl),混勻。
4. 將小柱放在2ml收集管上,將上述溶液加于柱上。
5. 4℃離心13000g×1min,棄去收集管中液體。
6. 加入500μl Buffer QG于柱上,4℃離心13000g×1min,棄去收集管中液體。
7. 加入750μl Buffer PE于柱上,4℃離心13000g×1min,棄去收集管中液體。
8. 4℃離心13000g×1min。棄去收集管。
9. 將柱放于一新1.5ml離心管上,加50μl EB于柱上。放置1min,4℃離心13000g×1min。
10. 取5μl 回收DNA電泳檢測。
三、 注意事項
紫外燈下切下含待回收DNA的凝膠時,要襯以干凈的塑料薄膜,使用無DNA污染的新刀片,其目的在于防止外源DNA的污染。
 
[ 網刊訂閱 ]  [ 食品專題搜索 ]  [ ]  [ 告訴好友 ]  [ 打印本文 ]  [ 關閉窗口 ] [ 返回頂部 ]

 

 
推薦圖文
推薦食品專題
點擊排行
 
 
Processed in 3.501 second(s), 1436 queries, Memory 4.31 M
主站蜘蛛池模板: 在线视频 一区二区 | 国产欧美综合在线 | 黄色伊人| 国产精品福利午夜h视频 | xxx日本69| 欧美亚洲三级 | 日韩一级片免费看 | 国产精品美女自在线观看免费 | 久久久久国产精品免费免费 | 欧美午夜小视频 | 午夜大片免费完整在线看 | 新天堂网 | 中文字幕一区二区三区精品 | 四虎永久在线精品影院 | 日本三级全黄三级a | 天天操天天舔天天射 | h在线免费观看 | xyx性爽欧美视频 | 天天操夜 | 五月激情综合婷婷 | 国产黄色在线免费观看 | 天天影视网天天影网 | 日韩毛片免费线上观看 | 日本免费成人 | 亚洲三级视频 | 深爱五月综合网 | 亚洲欧美国产视频 | 亚洲天堂视频一区 | 欧美一级二级三级视频 | 久久久久久久成人午夜精品福利 | 午夜三级a三点 | 九色综合九色综合色鬼 | 2018天天操天天干 | 全国最大色成免费网站 | 天天爱天天做天天干 | 天天视频官网天天视频在线 | 国模张文静啪啪私拍337p | 亚洲国产精品va在线观看麻豆 | 特黄特a级特别特级特毛片 特黄特色大片免费播放路01 | 一级特黄女毛毛片 | 一级片在线观看视频 |