體外轉錄合成siRNAs，其成本相對化學合成法比較低，是一種相對性價比高的篩選siRNAs的好方法，而且要比化學合成法更快的得到siRNAs。一旦得到DNA 雙鏈模版（這個還是需要DNA合成的，不過DNA合成的成本就比較低了），只要24小時轉染，不需要等很久。在體外構建雙鏈RNA時，分別在體外轉錄出正義和反義RNA，再將兩者退火，形成雙鏈RNA。體外合成的雙鏈RNA可以用脂質體轉入細胞中。但有些細胞脂質體轉移效果差，轉移到細胞內的雙鏈RNA半衰期短。

這個方法的不足之處是實驗的規(guī)模受到限制，雖然一次體外轉錄合成能提供足夠做數(shù)百次轉染的siRNAs，但是反應規(guī)模和數(shù)量始終有一定的限制。而且和化學合成相比，還是需要占用研究人員相當?shù)臅r間——化學合成只需要定購就可以了。但體外轉錄得到的siRNAs只要較低的濃度就可以達到化學合成siRNAs較高濃度得到的效果。

適用：篩選siRNAs，特別是需要制備多種siRNAs，試驗經費受限時。
不適用：1.需要大量的某個特定的siRNA。2.進行長期研究。