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質粒DNA的羥基突變

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-06

1.臨用之前制備羥胺溶液,置冰上待用。

2.將用氯化銫純化的10μg質粒DNA加到含500μl羥胺溶液的微型離心管。

3.在37℃下培養(yǎng)20小時。

4.加入10μl的5mol/L NaCl、50μg 1mg/ml的牛血清蛋白(BSA)和1ml無水乙醇終止反應,置-70℃沉淀DNA10分鐘。

5.離心10分鐘,小心棄去所有上清液,收集DNA。

6.將DNA懸浮于100μl TE緩沖液(pH8)中,再加入10μl 3mol/L的醋酸鈉和250μl的無水乙醇,在-70℃下放置10分鐘,重復步驟5,收集DNA。

7.讓沉淀自然干燥,再懸浮于100μl TE緩沖液(pH8)。

8.該DNA可直接用于大腸桿菌或酵母的轉化。誘變DNA與非誘變DNA相比,酵母的轉化頻率相對降低約3倍。在大腸桿菌中,Ura-質粒可被檢出。


 
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