作分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，核酸純化、酶切、克隆算是最基本的步驟了。因?yàn)橐龆ㄏ蚩寺。ǔＲ麟p酶切。為了省時(shí)省事兒，我們常常想方設(shè)法把兩個(gè)酶放在一起切。可是事情并非總那么稱心如意——兩個(gè)酶經(jīng)常在一起鬧別扭，不是反應(yīng)溫度不同啦，就是Buffer不同，有時(shí)候兩個(gè)酶切位點(diǎn)連在一起，必須先切一個(gè)再切另一個(gè)，否則就切不動——因?yàn)橛械拿赋俗R別位點(diǎn)之外還需要旁邊留有幾個(gè)堿基，如果正好被切掉了就出問題。于是有人就到處找通用Buffer——其實(shí)所謂通用Buffer也只勉強(qiáng)適用于少數(shù)幾個(gè)常用酶，而且往往會出現(xiàn)不是最佳反應(yīng)條件的問題、星號活力問題——想想看，酶在生物體內(nèi)精密調(diào)控各種反應(yīng)，不是最適條件當(dāng)然容易出問題——馬虎一下有時(shí)就會有莫名其妙的結(jié)果，該切的切不動，不該切的切掉了，該連接的連不上，倒霉上一次就能浪費(fèi)你幾個(gè)月時(shí)間。于是我們一股腦的怨：酶有問題。可是如果兩個(gè)酶分別切吧，費(fèi)時(shí)間不說，切完一個(gè)，還要純化好半天——就是不跑電泳也得酚氯仿抽提，本來就不多的樣品這么一折騰，夠嗆。幸好如今有了試劑盒，一切都簡單了。您別說，這試劑盒雖然花錢，原理也簡單，可是用起來就是方便。第一次酶切后，只要5、6分鐘可以很方便地快速純化酶切樣，不用酚抽不用乙醇沉淀，就可以進(jìn)行第二次酶切，保證最佳反應(yīng)條件，又何必煞費(fèi)苦心的作雙酶切呢，還可以減少一些人為的錯誤了。
MinElute DNA純化技術(shù)是基于一種特殊的、叫做Silica-gel-menbrane的膜，能夠在高鹽濃度的條件下迅速吸附DNA，在低鹽或者純水條件下釋放DNA，只要短短幾分鐘，就能徹底除去包括引物、核苷酸、酶、礦物油、鹽、瓊脂糖、EB以及其它雜質(zhì)，和以前QIAGEN的Silica-gel-menbrane有所不同的是，它要求的洗脫體積非常小，只要10微升，純化的DNA是高度濃縮的，方便進(jìn)行以后的反應(yīng)。回收率在80%以上。
反應(yīng)步驟非常簡單，只要將Binding Buffer加入酶切樣、PCR產(chǎn)物或者切下來的凝膠條中充分混勻，加入柱中離心，洗滌，用10微升ddH2O或Elution Buffer洗脫即可。純化的產(chǎn)物可用于連接、標(biāo)記、測序、雜交、酶切、顯微注射、體外轉(zhuǎn)錄等后繼實(shí)驗(yàn)。由于洗脫體積小，無需進(jìn)一步濃縮也能保證很高的回收率。比如雙酶切，可以在第一次酶切后將酶切樣直接純化，留下1、2微升電泳檢測，剩下的7、8微升樣品全部進(jìn)行下一個(gè)酶切，非常方便，不會浪費(fèi)樣品。不過它的吸附范圍是70bp到4kb，而不是以往的10kb。4kb以上的只能用以前的Qiaquick系列了，而10kb以上就該用QIAEX II系列。和以往一樣，MinElute系列也分為PCR回收試劑盒、膠回收試劑盒、反應(yīng)產(chǎn)物回收試劑盒可供選擇。
記得一位回國訪問的老師曾經(jīng)說起，以前覺得美國學(xué)生笨，只會照著試劑盒123的作實(shí)驗(yàn)，沒了說明書就不知如何是好，而中國學(xué)生聰明，能夠靈活運(yùn)用，可是如今發(fā)現(xiàn)中國學(xué)生有時(shí)太過靈活，省略不作對照、自作聰明地簡化實(shí)驗(yàn)步驟，最后出了問題也找不到原因，反而不好。當(dāng)時(shí)我們就說，沒辦法，都是沒錢惹的禍，舍不得買試劑盒——能省就盡量將就一下，就是買了還要想辦法節(jié)約一個(gè)對照，有時(shí)候就這么養(yǎng)成這種小家子氣的習(xí)慣。回過頭來想，真是：所謂“Research”就是要反反復(fù)復(fù)的“search”，不斷失敗，不斷“search”，如果一下子就成功就不叫“Research”了，沒有嚴(yán)謹(jǐn)良好的實(shí)驗(yàn)習(xí)慣就很難找到失敗的原因，就很難做好Research。
