指一個有功能的基因通過基因工程方法完全被剔除的人工突變技術。人為的將小鼠的某一種有功能的基因完全缺失的技術就稱為基因敲除技術。這項技術是Marrio Capecchi于八十年代末在Utah大學發展起來的。實驗的動物通常是小鼠，被敲除了功能基因的小鼠就稱為敲除小鼠(knockout mice)。基因敲除技術已成功地應用于幾種遺傳病的研究，還可用于研究特定基因的細胞生物學活性以及研究發育調控的基因作用等， 因此是研究基因功能的一項非常有用的技術。基因敲除是一套組合技術，包括基因重組、細胞分離培養、轉基因等。