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石蠟切片法

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-08-22
顯微技術(shù)切片方法之一。制法步驟較繁雜,但仍是一適用的傳統(tǒng)方法。①固定:取適當大小的新鮮材料如根、莖等,于指管固定液中12-24小時;干燥材料用水浸泡復原,或浸于50%甘油中軟化后使用,不須固定或固定。②沖洗:材料反復用常水,最后用蒸餾水徹底沖洗干凈,尤其是用鉻酸固定的材料,必須將鉻酸洗凈,否則影響染色。③脫水:材料經(jīng)10%-100%酒精,逐步脫凈水分。一般每步經(jīng)五1-2小時,愈往上時間愈長,至100%酒精,重復換1次,以保證完全脫水。④透化:用25%、50%、70%、90%二甲苯一無水酒精透化(如材料脫水不凈,進入此步,將出現(xiàn)渾濁),每隔2-3小時更換1次,至純二甲苯,重復換1次,使酒精完全脫除。⑤浸蠟:將指管(連同材料及二甲苯)放入60℃溫箱中,取熔點52-56℃的純凈石蠟小塊片(或熔融的石蠟)逐步加入指管中,使熔蠟達到飽和,并讓二甲苯徐徐揮散,換蠟3-4次,至口嘗無異味,如同嚼蠟為止。⑥包埋:將熔蠟及材料趁熱倒入預(yù)制小紙盒中,調(diào)整材料位置,使之疏散均勻,讓蠟漸漸冷凝,移浮于水面,至完全凝固。⑦切片:剝離紙盒,切取材料蠟塊,于旋轉(zhuǎn)切片機上切成連續(xù)蠟帶8-15μm厚。⑧粘片:被片上涂一薄層粘貼劑,加1滴水,切取蠟帶材料,燙手,烘干。⑨脫蠟:玻片置二甲苯中脫蠟(或不脫蠟)。⑩染色:可在水溶液或酒精液中染色(或二重染色)。復經(jīng)脫水、透化等步驟,最后封藏,標記。
 
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