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堿變性法、煮沸法、碘化鈉法提取制備模板核酸

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-07-01

堿變性法
取血清20ul,加入1mol/L NaOH 20ul,37℃30min,離心,加 1mol/L HCl 20ul,離心后,取上清5ul,用于PCR擴增.*亦有用10ul血清加NaOH至 0.2mol/L,37℃1h,再加HCL中和離心后取上清10ul做PCR,其特異性和敏感性較前法 更好.

煮沸法
經離心洗滌過的組織細胞,分泌物及血液標本,加適量無菌蒸餾水或PBS,混勻 后,100℃煮沸10~15min,14000r/min 10min,取上清做PCR.

碘化鈉法
取組織細胞及抗凝血液10~100ul,加等體積的6MNaI,反復輕混 20s,加等體積氯仿:異戊醇(49:1)振勻后,離心取上清加0.6體積的異丙醇,混勻后 置室溫3min.14000r/min 10min,沉淀加10~100ul,TE溶解,取5~10ul做PCR,亦有 用100ul血清加裂解液300ul(6M NaI,0.5%十二烷基肌酸鈉,10ug糖原,26mmol/L pH8.0 Tris-HCL,13mmol/LEDTA)混勻后,60℃15min,加等體積異丙醇,離心沉定 后,加TE液用于PCR擴增,其產量和質量較高.

 

 

 
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