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siRNAs制備的方法

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-01

目前為止較為常用的5種制備siRNAs的方法包括:

1.化學(xué)合成

2.體外轉(zhuǎn)錄

3.長片斷dsRNAs經(jīng)RNase III 類降解

4.siRNA表達(dá)載體或者病毒載體在細(xì)胞中表達(dá)siRNAs

5.PCR制備的siRNA表達(dá)框在細(xì)胞中表達(dá)

前三種方法經(jīng)過體外制備siRNAs然后應(yīng)用專門的RNA轉(zhuǎn)染試劑將siRNAs轉(zhuǎn)到細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)染或者電轉(zhuǎn)染導(dǎo)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞;后兩種方法則這兩種方法的優(yōu)點(diǎn)在于不需要直接操作RNA,依賴能夠表達(dá)siRNAs的DNA載體或者基于PCR的表達(dá)框架轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中,通過轉(zhuǎn)染到細(xì)胞的DNA模板在體內(nèi)的轉(zhuǎn)錄得到siRNAs。每種方法都有自己的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)。哪種是最好的方法,其實(shí)取決于實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?br />

比較項(xiàng)目

體外制備siRNA

體內(nèi)表達(dá)siRNA

化學(xué)合成

體外轉(zhuǎn)錄

RNase III降解dsRNA

SiRNA

表達(dá)載體

PCR

表達(dá)框

設(shè)計(jì)和篩選最有效siRNA序列

需要

不需要

需要

材料需求

21ntsiRNA

29nt siDNA

轉(zhuǎn)錄模版 (200-1000bp)

45-50nt dsDNA

~50nt dsDNA

制備規(guī)模

大量

受限

大量

受限

合成/制備 轉(zhuǎn)染

所需時(shí)間

4-2

dsDNA合成時(shí)間 1

轉(zhuǎn)錄模版制備時(shí)間 1

dsDNA合成時(shí)間 5天以上

dsDNA合成時(shí)間 6小時(shí)

個(gè)人所需操作時(shí)間

幾乎沒有

(只需定購)

中等

中等

標(biāo)記siRNA

進(jìn)行細(xì)胞定位

不能

轉(zhuǎn)染的難易程度

專門的RNA轉(zhuǎn)染試劑或者電轉(zhuǎn)染

DNA轉(zhuǎn)染,不直接操作RNA

檢測總體轉(zhuǎn)染效率

不能

不能

抑制時(shí)效(即穩(wěn)定性)

短暫

長期

短暫

制備費(fèi)用

相對較低

中等

 
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