1．感受態的制備
�。�1）接種單菌落于2ml LB培養液中， 37℃過夜。
（2）取0.25ml過夜菌入25ml LB培養液中，37℃振搖4～6h至A590=0.4～0.6。
�。�3）倒入50ml管內，水浴10min，以2500～3000rpm離心5min，棄上清。
�。�4）緩慢加入75mmol/L預冷CaCl25ml懸浮菌體，冰浴20min，同上離心棄上清。
�。�5）緩慢加入75mmol/L預冷CaCl21.0ml輕輕混勻后分裝在1.5ml Eppendorf管中，每管200μl，冰浴1～2h。
2．重組DNA的轉化
�。�1）將3只Eppendorf管按下列轉化項目作好標記：
（2）冰浴30min至1h。中間搖動3次，以防受體菌沉底。
�。�3）42℃90s。
�。�4）37℃水浴5min。
�。�5）加入無相應抗生素的Lb 200μl，混勻后，37℃水浴30～60min。
�。�6）分別取3組反應物各50μl在含相應抗生素的固體LB培養基平皿上涂布，室溫下干燥，然后倒置于37℃溫箱中培養過夜。
